Interference biotinem je jednou z mnoha možných interferencí, které se u imunochemických aplikací obecně vyskytují, avšak interference celkově představují jen určitou a malou podmnožinu chyb, jež se vyskytují v imunochemické diagnostice všech výrobců. 1,2
Na druhou stranu vazba biotin-streptavidin, která se během posledních 20 let úspěšně využívá i u dalších hlavních výrobců IVD, přináší zásadní benefity:
1) Streptavidin vytváří s biotinem silnou, vysoce stabilní a specifickou vazbu, přičemž jedna molekula streptavidinu má čtyři vazebná místa pro biotin. Lze tak docílit amplifikačního efektu.
2) Konjugací protilátek či jiných proteinů s biotinem, který je malou a stabilní molekulou, většinou nedochází u značené látky ke změnám biologických či vazebných vlastností.
Výsledkem jsou pak vysoce senzitivní, specifické a precizní imunometody.
Zdroje biotinu a situace v ČR
Zdrojem biotinu jsou tři základní typy přípravků:
1) Potravinové multivitaminové doplňky
Koncentrace biotinu v doporučené denní dávce těchto přípravků se celosvětově pohybuje mnohonásobně níže (30–60 µg) než koncentrace v tzv. limitní dávce (5 mg/den), která za určitých podmínek může způsobit interferenci. Doporučený denní příjem biotinu není stanoven, jelikož jeho deficience je velmi vzácná. Navrhovaný denní příjem v USA se pohybuje mezi 30–100 µg. 3
2) „Life style“ doplňky stravy
Před časem se v USA začaly vyskytovat tyto přípravky s vyššími až vysokými koncentracemi biotinu (až do 10 mg/den), které údajně pomáhají zlepšovat kvalitu vlasů, nehtů a kůže, nicméně pro tato tvrzení stále chybí klinická evidence. 4,5
3) Lék na roztroušenou sklerózu (Quizenday, MedDay Pharmaceuticals)
s velmi vysokou koncentrací biotinu byl v Evropě stažen z registračního procesu v listopadu 2017, a to z důvodu nedostatečně prokázané bezpečnosti léku, čemuž autorita EMA vyhověla. 6,7 Zavedení tohoto léku v ČR je nyní v nedohlednu a dříve avizovaný rok 2022 se dále posouvá.
Společnost Roche provedla podrobnou analýzu všech léků na předpis, volně prodejných léků a nutričních doplňků s obsahem biotinu předepsaných či prodaných v ČR (databáze SÚKL, Registr rozhodnutí hlavního hygienika (RoHy) / Databáze potravin pro zvláštní výživu a doplňků stravy schválených MZd ČR, web Heureka aj.) v roce 2017. Maximální doporučená denní dávka biotinu byla 1,2 mg, což je daleko pod úrovní limitu rizika interference.
Spolupráce Roche s FDA
Dne 28. 11. 2017 adresovala organizace Food and Drug Administration (FDA) všem odběratelům zpráv svého programu MedWatch bezpečnostní zprávu o důležitosti edukace vlivů biotinu na laboratorní testy. 8
Firma Roche byla, je a bude v nepřetržitém dialogu s FDA na toto téma, plně podporuje doporučení a deklaruje bezpečnost pacientů jako svou základní prioritu.
Ve zprávě FDA jsou zdůrazněny náležitosti, které se týkají všech výrobců IVD, nicméně firma Roche se rozhodla pro preciznější a detailnější komunikaci se zákazníky o možné interferenci biotinu u svých imunochemických aplikací.
Mezi hlavní zjištění patří:
- Nebyly zaznamenány žádné potvrzené případy biotinové interference, které by odporovaly informacím uvedeným v příbalových letácích (viz příklad na obrázku č. 2).
- Společnost Roche neobdržela žádné stížnosti na falešně nízké výsledky troponinu způsobené vyšším příjmem biotinu v USA ani ve zbytku světa.
- Denní dávky biotinu typicky obsažené v multivitaminových preparátech (30–60 µg) nepředstavují žádné riziko interference u Roche metod. 9
Navíc FDA zpráva sice zmiňovala interferenci biotinu u laboratorních metod, ale nebyly doplněny parametry o dávkách biotinu a kinetice odbourávání. Společnost Roche se proto rozhodla tuto záležitost objasnit s odkazem na výsledky recentní farmakokinetické (PK) studie, která byla publikována v recenzovaném časopisu International Journal of Pharmacokinetics. 10
Studie farmakokinetiky biotinu
Design studie
1) Do studie bylo zahrnuto 54 zdravých dobrovolníků přijímajících biotin ve 3 různých dávkách (18 na každou dávku).
2) Dávku představovaly tyto koncentrace biotinu: 5 000 µg, 10 000 µg a 20 000 µg za den.
3) Příjem biotinu byl omezen na 5 dní.
4) Vzorky krve byly odebrány ve dnech: 1, 2, 3, 6, 7.
5) V průběhu dne č. 3 byly stanovovány koncentrace 1, 3, 6, 8, 12 hodin po příjmu; ve dni č. 6 – 24 hodin po příjmu a ve dni č. 7 – 1, 3, 6, 8, 12 hodin po příjmu biotinu.
Na základě analýzy dat provedené ve spolupráci s Roche Pharmaceuticals bylo zjištěno, že biotin měl lineární farmakokinetiku v rozmezí sledovaných dávek (5–20 mg) a rychle se absorboval s efektivním sérovým poločasem 15 hodin. Ustálený stav byl dosažen za 3 dny (viz obrázek č. 3).
Hlavní výstupy
Výsledky, publikované v časopise International Journal of Pharmacokinetics, potvrzují, že 100 % účastníků studie užívajících 5 mg biotinu za den (QD = „quaque die“ – 1x za den) bylo pod hranicí interference 30 ng/mL během 3,5 hodiny od požití přípravku. Dále bylo zjištěno, že 100 % účastníků studie užívajících 10 mg biotinu za den se dostalo pod toleranční hranici 30 ng/mL během 8 hodin (viz obrázek č. 4).
U biotinových režimů <= 10 mg QD (10 mg je > 300násobek odpovídajícího denního příjmu) byly hodnoty hladiny biotinu v séru nižší než nastavený interferenční práh in vitro (>= 30 ng/mL) po 8hodinovém odbourávání. V extrémních případech se u pacientů, kteří užívají denní dávku > 10 mg, očekávají delší časy nutné k odbourání biotinu.
Souhrn
Je možné konstatovat, že PK studie Roche ověřila farmakokinetické vlastnosti biotinu v krevním řečišti a rovněž potvrdila správnost interferenčních koncentračních limitů uvedených v příbalových letácích Elecsys® metod. Navíc bylo identifikováno hned několik testů s vyššími tolerancemi oproti hodnotám uvedeným v příbalových letácích.
Proto nadále doporučujeme našim laboratorním partnerům a klinikům, aby pokračovali v používání našich testů na základě informací uvedených v příbalových letácích.
Další postup
Firma Roche soustavně pracuje na minimalizaci interference u všech metod Elecsys® a cobas h 232 tak, aby byla připravena plnit přísné bezpečnostní standardy a dynamicky reagovat na měnící se budoucnost. Proto v průběhu roku 2018 budou aktualizovány příbalové letáky 3 metod Elecsys® dle výsledků aktuální PK studie a v následujícím období, končícím rokem 2020, budou provedeny technické aktualizace u zbylých 8 metod, které
v současnosti nesplňují limit 30 ng/mL. O všech jednotlivých aktualizacích vás budeme informovat formou „Důležitých upozornění“.
Závěr
Společnost Roche se zavázala zajišťovat spolehlivé výsledky u všech testů Elecsys® a cobas h 232. Vlastní sofistikovaný design metod využívajících biotin umožňuje vyvíjet testy s vysokou mírou senzitivity a specifičnosti, které poskytují správné a konzistentní výsledky napříč šaržemi. V současné době na území ČR nejsou známy žádné případy interference imunochemických metod biotinem. Analýza prokázala, že ani výhledově se takováto situace neočekává, jelikož dosud schválená léčiva a potravinové doplňky v maximálních denních dávkách jsou stále hluboko pod limity používaných metod – pouhých 1,2 mg.