Firma Roche na podzim roku 2015 zdokonalila své portfolio testů pro prediktivní onkologickou diagnostiku uvedením druhé verze testu cobas® EGFR, který umožňuje vyšetřovat mutace ne-jen ze vzorků tkání, ale i plazmy.
Test mutace genu EGFR cobas® v2 (katalogové číslo: 05985536190) je PCR test v reálném čase určený ke kvalitativní detekci a identifikaci mutací v exonech 18, 19, 20 a 21 genu receptoru pro epidermální růstový faktor (EGFR) v DNA získané z formalínem stabilizovaných nádorových tkání v parafínu (FFPET) nebo z plazmy pacientů s nemalobuněčným karcinomem plic (NSCLC). Test slouží rovněž jako pomůcka při výběru pacientů s NSCLC k léčbě inhibitory tyrozinkinázové aktivity EGFR (TKI). Test mutace genu EGFR cobas® v2 pro použití se vzorky plazmy je dále určen pro semikvantitativní měření mutace v exonech 18, 19, 20 a 21 genu EGFR z postupné řady odběrů lidské plazmy jako pomůcka při léčbě pacientů s karcinomem NSCLC. Vzorky FFPET se zpracují pomocí soupravy cobas® DNA Sample Preparation Kit (katalogové číslo: 07248563190) a vzorky plazmy se zpracují pomocí soupravy cobas® cfDNA Sample Preparation Kit (katalogové číslo: 07247737190). Test mutace genu EGFR cobas® v2 a analyzátor cobas® z 480 se používají společně k automatizované amplifikaci a detekci.
K aktivaci mutací genů receptoru EGFR dochází zvláště při NSCLC a tato aktivace vede k nezbytné aktivaci činnosti kinázy bílkoviny EGFR, což přispívá k procesu onkogeneze. Nejčastější mutace genu EGFR u NSCLC zahrnují různé delece v exonu 19 a substituční mutace L858R v exonu 21; tyto mutace společně představují asi 85 % mutací genu EGFR pozorovaných u NSCLC. Test mutace genu EGFR cobas® EGFR v2 je test PCR probíhající v reálném čase založený na dvou základních postupech: (1) manuální příprava vzorku za účelem získání DNA z FFPET nebo plazmy a (2) PCR amplifikace a detekce cílové DNA pomocí komplementárních párů primerů a oligonukleotidových sond značených fluorescenčním barvivem. Test cobas® EGFR je určen k detekci těchto mutací:
- Exon 18: G719X (G719A, G719C a G719S)
- Exon 19: delece a komplexní mutace
- Exon 20: S768I, T790M (mutace T790M je zodpovědná za vznik rezistence na TKI)
- Exon 21: L858R a L861Q
Podmínkou pro léčbu TKI je přítomnost mutací EGFR. Produkt cobas® EGFR Mutation Test v2 pokrývá více mutací než konkurence, jsou-li tedy pacienti testováni tímto testem, je možné léčbu TKI předepsat více pacientům. Ze srovnání testu cobas® s testem Qiagen vychází cobas® jako jasný lídr s větším pokrytím mutací, lepší citlivostí na TKI, resp. rezistentní mutaci T790M, a s větší citlivostí na delece v exonu 19, které jsou nejvhodnější pro TKI léčbu. Detekce mutací je dosaženo prostřednictvím PCR analýzy pomocí analyzátoru cobas® z 480. V každém cyklu je zařazena kontrola mutace a negativní kontrola pro potvrzení platnosti cyklu. Soupravy cobas® DNA Sample Preparation Kit a cobas® cfDNA Sample Preparation Kit jsou určeny pro manuální přípravu vzorků a jsou založené na vazbě nukleové kyseliny na skelná vlákna.
V analyzátoru cobas® z 480 je amplifikována a detekována cílová DNA pomocí amplifikačních a detekčních činidel dodávaných v soupravě testu mutace genu EGFR cobas® v2.
Mutační test cobas® EGFR v2 poskytuje lékaři potřebné a nezpochybnitelné informace k rozhodnutí o vhodné léčbě.
Výhodou testu cobas® EGFR v2 je, že je určen pro oba typy vzorků, tkáň i plazmu, tudíž odstraňuje potřeby laboratoře na nákup samostatné soupravy pro testování různých typů vzorků. Pracovní postup zapadá do současných laboratorních pracovních postupů – jakmile je DNA izolována ze vzorku tkáně nebo plazmy, kroky pro EGFR amplifikaci, detekci a vydání výsledků jsou identické.
- Umožňuje identifikaci 42 mutací v exonech 18, 19, 20 a 21 genu EGFR.
- S použitím vzorků plazmy je určen pro semikvantitativní měření mutace v exonech 18, 19, 20 a 21 genu EGFR z postupné řady odběrů lidské plazmy – pomůcka při léčbě pacientů s karcinomem NSCLC.
- Výsledky jsou vydány do 4 hodin (plazma) nebo 8 hodin (tkáně).
- Dovoluje provést najednou smíšené testování EGFR ve vzorcích tkání a vzorcích plazmy.
- Automatizovaná interpretace výsledků poskytuje konzistentní, objektivní a reprodukovatelné výsledky.